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电泳设备中电泳过程中出现拖尾现象怎么解决?

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电泳设备中电泳过程中出现拖尾现象怎么解决?

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  • 发布时间:2021-06-17 19:39
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电泳设备中电泳过程中出现拖尾现象怎么解决?

【概要描述】电泳设备中电泳出现拖尾现象,英文成为smear,就是弥散。其原因,主要从以下两个方面考虑: 1、PCR产物自身原因: 往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物过多。 对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。③适当降低Mg2+浓度。④增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度。 2

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电泳设备中电泳出现拖尾现象,英文成为smear,就是弥散。其原因,主要从以下两个方面考虑:
 
1、PCR产物自身原因:
 
往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,
退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物过多。
 
对策:
①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶。
②减少dNTP的浓度。
③适当降低Mg2+浓度。
④增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度。
 
2、电泳体系的问题:
(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液。
(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样。
(3)电压太高。
(4)适当把你的胶的浓度加大。(根据你的片断大小而定)
(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照。
 
 
PCR拖尾及假阳性的原因及对策
拖尾现象:产物在凝胶上呈Smear状态。
 
原因:
1.模板不纯
2.Buffer不合适
3.退火温度偏低
4.酶量过多
5.dNTP、Mg2+浓度偏高
6.循环次数过多
 
对策:
1.纯化模板
2.更换Buffer
3.适当提高退火温度
4.适量用酶
5.适当降低dNTP和镁离子的浓度
6.减少循环次数
 
假阳性
现象:空白对照出现目的扩增产物
原因:
靶序列或扩增产物的交叉污染
对策:
1.操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外;
2.除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及加样枪头等均应一次性使用。
3.各种试剂最好先进行分装,然后低温贮存
 
 
电泳设备运行中出现的问题要及时应对,有因有果,找对方法一定可以很好解决电泳设备中电泳出现拖尾现象!
 

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